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CD1d四聚体

哈佛大学医学院的Markus Skold博士和Sam Behar博士用CD1d R-PE标记的四聚体对去B细胞的naive B6小鼠脾细胞进行了检测。使用空载或预装α-GalCer的四聚体。细胞经anti-CD4-Alexa 488和anti-CD3-PerCP单克隆抗体染色,对有活性的CD3阳性细胞设门。

采用CD1d四聚体检测NKT细胞
  全球唯一的荧光标记人和小鼠CD1d四聚体供应商。
  CD1d-脂质复合物与NKT细胞的T细胞受体特异性结合(由使用的脂质配体决定), 采用流式细胞仪可对抗原特异性CD1d限制的NKT细胞进行识别和计数。
  四聚体有良好的荧光亮度和实验重现性。为了避免溶解和装配最常用的配体α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)相关的困难, 我们提供预装配的四聚体。我们还提供空载的四聚体,您可以自行选择装载配体。

1、独有的预装 α-GalCer和空载的人、小鼠荧光标记CD1d四聚体
2、人和小鼠CD1d四聚体阴性对照
3、R-PE 或 APC 标记
4、规格:50T、150T、500T
5、用于流式细胞仪对抗原特异性CD1d限制性NKT细胞进行识别和分类

  NKT细胞广泛参与调节一系列疾病的相关免疫反应,在免疫的许多方面发挥重要作用。他们代表共表达NK细胞标志物和半不变T细胞受体的特有淋巴细胞群体。被CD1d限制的糖脂类抗原刺激后,NKT细胞会产生大量Th1型以及/或者Th2型细胞因子,进而激活下游的树突状细胞、NK细胞、B细胞和T细胞。NKT细胞的功能紊乱或不足都会导致自身免疫疾病(如糖尿病或动脉粥样硬化)和癌症,并且和人类哮喘病的疾病进展相关。

  α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)是表征最清楚的CD1d配体,最初来源于海绵提取物。NKT细胞识别由CD1d分子递呈的α-GalCer后会快速产生大量IFN-gamma和IL-4,使α-GalCer发挥疗效。最近,iGb3被鉴定为CD1d配体。研究认为该内生鞘脂与NKT细胞的发育有关。

人CD1d阴性对照四聚体
  荧光标记人CD1d阴性对照四聚体只与载体(未装配体)进行了模拟装配, 将不会与NKT细胞结合。阴性对照和预装配体的CD1d四聚体一起使用可以对低出现频率的阳性群体进行精确计数。注:阴性对照CD1d四聚体不可以装载配体。

实验数据
  人CD1d 四聚体和阴性对照四聚体:
  预装α-GalCer人CD1d四聚体和阴性对照四聚体,APC标记,检测PBMC。


  图1: 1×106 PBMC和1 Test(0.5ml)APC标记预装α-GalCer人CD1d四聚体共同孵育(左),或和1 Test(0.5ml)APC标记人CD1d阴性对照四聚体4℃共同孵育30分钟(右)。清洗后,细胞和50ml总体积的anti-CD3 FITC和anti-CD19 PE 4℃共同孵育20分钟。两步清洗后细胞进行流式获取分析。CD19阴性细胞设门去除非特异性染色,然后再绘制CD1d四聚体vs CD3散点图。
  人CD1d四聚体已被证明可以标记恒河猴PBMC。

小鼠CD1d四聚体:
  哈佛大学医学院的Markus Skold博士和Sam Behar博士用CD1d R-PE标记的四聚体对去B细胞的naive B6小鼠脾细胞进行了检测。使用空载或预装α-GalCer的四聚体。细胞经anti-CD4-Alexa 488和anti-CD3-PerCP单克隆抗体染色,对有活性的CD3阳性细胞设门。
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  图2:为了降低背景染色的干扰,用CD19微球去除脾细胞中的B细胞。每次染色使用3×105个细胞。细胞和50ml的25mg/ml2.4G2单抗4℃共同孵育15分钟以阻断Fc受体。清洗后,细胞和1 Test(2ml)的小鼠CD1d四聚体共同孵育30分钟。然后在4℃和总体积50ml的anti-CD4-Alexa 488和anti-CD3-PerCP单抗孵育20分钟。两步清洗后,细胞可进行流式获取和分析。

技术资料:
  R-PE labeled empty human CD1d tetramer
  R-PE labeled pre-loaded human CD1d Tetramer
  R-PE labeled human CD1d negative control tetramer
  R-PE labeled empty Mouse CD1d tetramer
  R-PE labeled pre-loaded Mouse CD1d tetramer
  R-PE labeled mouse CD1d negative control
  Fluorescent-labeled CD1d Tetramer Staining Protocol

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产品编号

产品名称

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